液体菌种的制作

液体菌种的制作

大连富森科技有限公司


液体菌种部分
 
一、食用菌的基础知识
 
食用菌的概念：能够为人类提供可食用的胶质的或肉质的子实体的大型真菌。
 
（一）食用菌在自然界里的分类地位
 
在自然界中有1500多万种生物，大致可分为五界：病毒界、原核生物界、真菌界、植物界、动物界。病毒界生物没有细胞结构，是最低等的生物。原核生物有细胞结构，只是原核是一絮状的核区。如细菌。其余三界都有核膜，是真正的细胞核，总称为真核生物。真菌界生物主要是分解吸收异养型。植物是光合自养型。动物是摄食异养型。食用菌是大型的真菌。人工栽培的食用菌大都是担子菌。
 
（二）食用菌的营养和生态环境
 
1.营养
 
碳素：是能量物质，需要量很大。如玉米芯、棉籽壳、木屑、稻草、玉米桔等。
 
氮素：是合成蛋白质和核酸的重要原料，是原生质及细胞的结构的重要成分。如尿素、蛋白胨、麸皮等。
 
碳素和氮素之间的比例很重要，称之为C/N。一般说，营养生长阶段的最适碳氮比为20：1，生殖生长阶段为30-40：1。
 
矿物质营养：P、S、K、Mg、Ca等，这些物质有的是细胞的组成部分，有的是酶的组成部分，有的参与能量转移等，用途不一，量都不多，但是一旦缺乏，影响整个生命过程，造成生长发育不良。
 
生长素：是组成各种酶的活性基团的成分，一旦缺乏，酶就失去活性，生命活动不能正常进行。像VB1、VB2、生长刺激素、三十烷醇、萘乙酸等。
 
2.生态环境
 
水分：是生命活动不可缺少的物质，菌丝体含水量一般为70-80%，代料栽培含水量一般60-65%比较适合菌丝生长。子实体含水量一般为85-95%。空气相对湿度低于65%子实体停止生长，40-45%时，子实体不再分化，已分化的也会干枯死亡。高于95%蒸腾作用受阻，子实体停止生长。另外，高湿环境也是病虫害曝发的诱因。
 
温度：菌体细胞的很多的生化反应都是在酶的参与下进行的，而酶的活性与湿度有直接关系。一般木腐菌的有效温区为5-30°C。根据不同品种对湿度的要求的差异，食用菌可分为三个类群：低温结实型：金针菇；中温结实型：双孢菇；高温结实型：草菇。
 
空气：食用菌是好氧性真菌，呼吸作用和其它生物是一样的。吸入氧气，排出二氧化碳，使全内的有机物分解，释放能量，满足自身生长发育的需要。对食用菌生长发育影响最大的是氧气和二氧化碳。
 
光：由于自然选择的结果，菌丝生长阶段最好不见光，在黑暗条件下生长的很好，光线对菌丝有强烈的抑制作用。在子实体阶段需要有一定量的散射光。不然子实体会畸形。各品种对光线的要求也不尽相同。
 
PH值：主要是对酶的活动影响巨大。酶的活动必须在适宜的PH值下活性最强。
 
在人工栽培中，栽培料的PH值一般都不用调。有的还添加一些二氢钾什么的，以缓冲PH值的变化。
 
（三）栽培安排
 
1.栽培计划
 
（1）栽培料及其它物资的购进
 
要想栽培食用菌，栽培料必须提前购进。如果是用玉米芯栽培平菇，应提前一周左右购进就行了，玉米芯要求黄豆粒大小，新鲜、无霉变。要是用木屑栽培，那得提前三个月以上购进木屑才行。木屑越陈越好。其它的辅料要求是新鲜的。栽培香菇，得提前半年以上购进木屑。
 
栽培袋、绳、套环、药品等提前几天做好就行。
 
（2）菌种的选择及购进
 
菌种的购进应视栽培技术而定，应该在该品种的栽培之日向前推算制种日期。试管扩繁要7-15天，二级种要25-30天，三级种要35-40天左右。一共要90天左右。如果是购二级繁三级，要提前40天购进二级种，最好是长一半就买来，这样能看着菌丝生长，做到心里有数。
 
如果是用液体菌种，必须用熟料，按蒸料的日期提前2天做菌种就行了。如果是大量做，要根据自己的生产量，合理安排菌种的生产。
 
（3）模式的确定
 
栽培模式要看当地的资源，如果是玉米产区，用发酵料栽培就行了。如果玉米芯不多，用木屑也行。但木屑最好是熟料栽培。如果是栽培其它品种，要根据具体情况来定。
 
（4）茬口的安排
 
目前做秋冬茬的多，春夏茬的少。如果想周年生产，要有一个合理的茬口安排。

二、液体菌种的基础知识
 
（一）液体菌种的优缺点
 
1.优点：固体菌种的生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工和场地，并且管理困难。很难适应大规模生产的需要。液体菌种生产一般是由试管母种到发酵罐专用母种到发酵罐，具有菌龄短、纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。适合进行大规模的生产。
 
相对于固体菌种，液体菌种有以下优点：
    （1）液体菌种生产周期短。从试管母种到专用母种到发酵罐子一般要15天就完成了。而固体种需要70天左右。
    （2）接种迅速，萌发点多。液体菌种接种与玩水枪相似，一般一小时可以接种2000-3000袋。接种后，萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，15天左右长满菌袋。
    （3）污染少、成本低。液体菌种由于萌发快，杂菌来不及污染菌种就已经布满表面，污染的机会很少，污染率很低。用液体菌种接种一般每袋菌种成本是2-5分钱。
 
    （4）品种更换方便。如果想更换品种，10天就可以生产好菌种，不象固体菌种那样得提前二个月生产菌种。
    （5）适宜工厂化生产。可直接大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。    
 
2.缺点：
 
（1）一次性投资大。一般都得1多万元。
 
（2）技术要求高。凡是想做液体菌种的，必须到厂家或厂家的培训基地进行学习。再就是要有售后跟踪服务。若自已摸索试验，失败的损失远远大于在正规培训班的学费，这是从实践中总结出来的经验教训。好多的人购买发酵罐后，因为各项技术没有到位，达不到预期的效果而束之高阁。这主要是因为技术学的不到位或厂家的技术培训不到位。一定要选择正规的、技术力量雄厚的并有多种食用菌栽培经验的单位去学习，才能学到真正的知识，一举成功！
 
（3）生产规模要大。液体菌种生产适合规模化生产，要是规模小了，就会造成产能的浪费，设备的闲置。这也制约了一部分人的使用。
 
（二）液体菌种的关键技术
 
1.空气过滤：液体菌种要求通无菌空气，空气过滤就成了生产成败的一个主要因素。目前本公司的罐的过滤器可反复蒸灭使用300次，不怕水，过滤精度0.01μm。可以充分满足液体菌种生产的要求。
 
 2.专用母种的生产：如果专用母种做的好，罐内菌种的生长速度快，菌球形状好，否则，就差得很多，在生产上会造成很大的影响（双孢菇专用母种就是个例子）。因此专用母种的制作必须当一个重要课题来研究。
 
 3.通气量的控制：也就是供氧量的控制。菌丝是吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢。一般来说，在压力和温度一定的情况下，通气量再大，也不会增加液体中氧气的含量。但是，目前的罐一般都是气体搅拌，量少了，搅拌和氧气量不够。多了，搅拌剧烈，菌球形状不好，而且还浪费能源。这样，就要设计一个最佳的方案。本公司的罐都已经设计好了，客户按说明和培训时的要求去做就行了。
 
 4.质量的检测：液体菌种生产出来后，经验少的人不知道菌种质量好坏，特别是没有经过培训的人，更是不知道怎么办。如果直接就接下去，可能造成大规模污染，损失是巨大的。因此液体菌种的质量检测就是新人的必修课题。
 
 5.接种技术：不同的栽培袋和不同的品种在接种技术上不同的。有些品种必须特别注意，要不就会造成菌种不长或是污染严重。

（三）液体菌种的制作方法
 
    液体菌种的生产方式可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。
1.电磁搅拌法比较简单，投资也比较少，200元钱的投资就可进行生产。从接种到菌丝长好要7天时间。但也存在生产量小的缺点，所以生产中常用几个搅拌器同时生产来加以解决。也可以用扩张法来加以解决。主要生产过程：在无菌条件下将试管种接到三角瓶里，搅拌4-7天后得到大量的菌种。
 
2.摇瓶机法也是一种比较简单的方法，接种简单，管理方便，生产量根据机器的设定而不同。投资要1000-3000元钱。但也存在噪音大等缺点。生产过程：在无菌条件下将试管种接到瓶内，摇动。一般7天左右会出现大大量的菌球。
 
3.简易深层发酵（吹氧）法相对来说比较麻烦一些，主要是器材的联接要在无菌状态下进行，如果哪个环节出现问题，不能保证成功率。投资也要3000多元。生产过程：在无菌条件下将试管种接到容器内，通气培养7天，得到大量的菌球。
 
4.发酵罐法是目前要求最高的一种，涉及到好多方面的知识，很难自学成才，而且投资也高，一般要10000元以上。如果你的生产量大或是菌种场，建议你还是用发酵罐比较好。因为生产量大，很快就会把你的投资收回来，而且可以减轻你很多工作量。
 
发酵罐液体菌种的生产主要过程：专用母种的生产，时间在一周之内。发酵罐接种后，一般品种在三到五天内生产好。时间的长短一是看罐的大小，二是看品种。各有不同。
 
需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团，而摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。
 
（四）液体菌种的工艺流程及生产要点
 
工艺流程图：
              空气压缩→过滤
                         ↓
配料→装罐→灭菌→冷却→接种→培养→液体种
                         ↑
     试管斜面种→ 三角瓶液体专用母种
   
 1.试管种的生产
 
液体菌种对试管的纯度要求很高。生产前,先要将试管种进行纯化,不然很难生产出液体种。纯化的方法有二种：固体种生产法和菌种提纯法。二者可任选其一。
    
2.三角瓶液体菌种专用母种生产
 
专用母种分固体和液体两种。从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。但是，固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30%左右。我们建议用液体专用母种。
   
 3.发酵罐生产
    生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的培养基直接加入到罐内加热，125℃维持40分钟到一小时左右进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至培养温度，而后将并瓶后的三角瓶专用种接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。
    培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，控制好压力。如遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。
   
 （五）液体菌种的检测方法
 
1.菌球的形态：菌种长好后会看到大小均匀、活力旺盛、毛刺明显的大量的菌球，静止5分钟后菌球点菌液浓度的80%以上或不分层。若菌球很少或大小不一，则可能是质量有问题。
 
2.菌液澄清度：菌液中除菌球外无其它固形物，菌液由前期的微浑浊变得澄清或橙黄色。如变得浑浊不清则很可能是染菌。
 
3.菌液气味：到培养后期菌液的糖香味会逐渐消失，取而代之的是或有或无的菌种特有的清香味。若有臭味、酸味、霉味则是染菌。
 
4.不知道是什么：若依以上指标还不能判断菌种的质量，还可将菌种接到空白试管上，放在20-25℃条件下静止48小时左右，若表面菌种萌发明显，且无其它颜色的孢子，则多为正常，若有其它特殊颜色则为污染。

三、液体菌种制作过程中的关键点 

（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。所以要自己会做试管种。
 
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。塞上棉塞就行了。这样的成功率一般在80%以上。在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
 
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
 
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
 
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
 
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
 
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。一般20多天可以长好。具有运输和贮存方便等特点。
 
搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。工作时，机械的磁转子转动时，瓶内的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。
 
摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。
 
我们用液体专用母种。
   
 （三）发酵罐生产

    生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌，125℃维持40分钟到一小时进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至30℃以下。将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。
    培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，压力控制在**Mpa。如遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。
 
（四）接种
 
液体菌种生产结束后，在检测合格的情况下，就要进行接种。接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上，放到高压锅里进行灭菌。121℃20分钟就行了。与此同时，将接种机打开工作。在接种时，前几枪不要接到栽培袋里，应该先喷到量筒里，以检查接种量的大小。全部接种过程都要在接种机下进行。
 
（五）液体菌种的制作难点
 
1.试管的选择：生产液体菌种时，试管的选择非常重要，有好多的人就是在试管的选择上出问题，总是做不出专用母种。在生产上，我们要求试管一是自己新生产的，再一个就是存放时间短的。长期存放的、上面长霉菌的，一定不能用。
 
2.三角瓶专用母种的制作：三角瓶专用母种其实很好做，就是有些人不求甚解，以为接上种就可以，其实这样是永远都不会生产出三角瓶的。这里面的操作细节一定要掌握。
 
3.发酵罐的制作细节：发酵罐其实很好操作，只是做为一个最后的环节，它要求的是细节。操作规程上说的那些是对的，只是要想做得好，最好是学习一下。由老师亲自做一次，注意哪个地方应该特别小心，也就是细节要特别小心，可保成功率。
 
4.接种技术：接种技术对于固体来说应该没什么的，可以在液体菌种上，是有说法的。特别是一些特别品种，在接种时应该特别注意。
 
5.栽培料的含水量和接种量的控制：这一项没做好，是好多人做液体菌种失败的一个重要原因。需要一些计算公式和方法。
 
液体菌种制作与士兵用枪射击是一个道理，其实一般的人也会射击，可是要想一枪毙命，正中眉心，就不是一般人能做到的了，要经过系统的学习和训练。理论上说的是一回事，实际上做的又是一回事。
 
正常情况下，经过系统培训的人，在做液体菌种时，成功率应该在95%以上。能熟练掌握试管的制作、搅拌器和摇瓶机的液体菌种制作技术，能自己一个人操作液体菌种发酵罐、懂得不同品种的接种技术。经常做的人，应该在98%以上，甚至更高。这里面除了技术外，还有设备的问题。